司法鉴定技术规范之亲权鉴定技术规范
2012-12-06 12:18:01 来源:司法部网站 作者:admin-云南昆明律师司 法 鉴 定 技 术 规 范
SF/Z JD0105001-2010
亲权鉴定技术规范
中华人民共和国司法部
司 法 鉴 定 管 理 局 发布 SF/Z JD0105001-2010
I
目 次
前言 ………………………………………………………………….. II
1 范围 …………………………………………………………………… 1
2 规范性引用文件 ………………………………………………………….. 1
3 术语和定义 ……………………………………………………………… 1
4 检验程序 ……………………………………………………………….. 2SF/Z JD0105001-2010
II
前 言
本标准(草案)运用法医物证学、生物学和遗传学的理论和技术,结合法医物证鉴定的实践经验而制
定,为三联体、二联体和祖孙亲权鉴定提供科学依据和统一标准。
本标准由司法部司法鉴定科学技术研究所提出。
本标准由司法部司法鉴定科学技术研究所负责起草。
本标准主要起草人:李莉、李成涛、柳燕、林源、赵书民、阙庭志、赵珍敏。SF/Z JD0105001-2010
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亲权鉴定技术规范
1 范围
本标准规定了我国法医 DNA 实验室进行亲权鉴定所必须遵循的技术要求。
本标准适用于从事亲权鉴定的DNA实验室,不适用于大通量数据库的比对。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本部分的条款。凡是注明日期的引用文件,其随后所有
的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研
究是否可适用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件,其最新版本适用于本部分。
CNAS-CL01:2006 检测和校准实验室认可准则
GA/T382-2002 法庭科学DNA实验室规范
GA/T383-2002 法庭科学DNA实验室检验规范
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1 亲权鉴定 Parentage Testing
亲权鉴定是通过对人类遗传标记的检测,根据遗传规律分析,对个体之间血缘关系的鉴定。
3.2 三联体亲子鉴定 Parentage Testing of Trios
被检测男子、孩子生母与孩子的亲子鉴定。
3.3 二联体亲子鉴定 Parentage Testing of Duos
被检测男子与孩子的亲子关系鉴定。
注:被检测女子与孩子的亲子关系鉴定也属于二联体亲子鉴定,但本标准界定的是被检测男子与孩
子的亲子关系鉴定。
3.4 祖孙亲缘关系鉴定 Kinship Analysis of Grandparents and Grandchildren
祖孙亲缘关系鉴定是通过对人类遗传标记的检测,根据遗传规律分析,对有争议的祖父母与孙子女
血缘关系的鉴定。
3.5 遗传标记 Genetic Marker
具有多态性的基因座。用于亲子鉴定的遗传分析系统由一定数量的遗传标记组成,常用的有常染色
体短串联重复序列(STR)、Y染色体短串联重复序列(Y-STR)、X染色体短串联重复序列(X-STR)。
3.6 排除概率 Power of Exclusion, PE
对于不是孩子生父的随机男子,遗传分析系统具有的排除能力。它是遗传分析系统效能的评估指标。 SF/Z JD0105001-2010
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3.7 亲权指数 Paternity Index, PI
亲权指数是亲权关系鉴定中判断遗传证据强度的指标。它是两个条件概率的似然比率:
概率 检测到当事人的遗传表型 假设一个随机男子是孩子的生物学父亲
概率 检测到当事人的遗传表型 假设被检测男子是孩子的生物学父亲
PI =
4 检验程序
4.1 采样要求
对于三联体,采集被检测男子、孩子生母与孩子的样本用于检验;对于二联体,采集被检测男子与
孩子的样本用于检验;对于祖父母与孙的鉴定案例,则采集被检测祖父、祖母、孩子生母与孩子的样本
用于检验。样本一般是血液(斑)或口腔拭子(唾液斑),其它人体生物学材料如带毛囊毛发、羊水、
组织块、精液(斑)等亦可作为亲权鉴定的样本。样本必须分别包装,注明被采样人姓名、编号、采样
人、采样日期等,置于冰箱冷藏或冻存。
采样时,需要填写采样单,写明委托方名称、采样日期、采样类型、被采样人姓名、性别、称谓、
出生日期、证件号码等,并拍摄被采样人照片,由被采样人在采样单上留下右手拇指或食指指纹(婴儿
可留右脚拇趾印),并签名确认(婴幼儿的姓名由其监护人代签)。
对于接受了外周血干细胞移植的当事人,应避免采集其血样作为检验材料,宜取其口腔拭子(唾液
斑)或毛发进行检验。
4.2 DNA 提取
采用 Chelex-100 法(见如下步骤)或其它经过了验证的方法抽提 DNA。若不经过 DNA 抽提而直
接将检材用于 PCR,方法必须经过验证。
4.2.1 从血样中提取 DNA:
a) 在 1.5 mL 离心管中加 1 mL 纯水,然后加入血样(不少于 3 µL 血液或 9 mm
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血斑),小心混
匀;放置 30 min,间歇振荡;
b) 10,000-15,000 r/min 离心 2-3 min;小心移去上清液。若样品为血斑,则保留载体;
c) 沉淀中加入 5% Chelex 100(100-200 目)200 µL,56℃保温 30 min;
d) 高速振荡 5-10 s;沸水浴 8 min;
e) 高速振荡 5-10 s;10,000-15,000 r/min 离心 2-3 min,取上清液用于扩增反应;2-8℃保存或冻存
剩余 DNA。
4.2.2 从口腔刮拭物样本中提取 DNA:
a) 用牙签刮拭口腔粘膜,将其放入 1.5 mL 离心管内,加入 200 µL 5% Chelex(100-200 目);搅
动,使细胞脱落;
b) 56℃保温 15-30 min;SF/Z JD0105001-2010
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c) 高速振荡 5-10 s,沸水煮 8 min;
d) 高速振荡 5-10 s,10,000-15,000 r/min 离心 2-3 min;
e) 取上清液用于扩增反应;2-8℃保存或冻存剩余 DNA。
4.2.3 从毛发中提取 DNA:
a) 用纯水清洗毛发;剪取毛根部分,放入 1.5 mL Eppendorf 管中;
b) 加入 200 µL 5% Chelex 100(100-200 目)及 2 µL 10 mg/mL PK(蛋白酶 K),56℃保温 6-8 hr
或过夜;
c) 高速振荡 5-10 s;沸水煮 8 min(注意毛发应浸没于 Chelex 液中);
d) 高速振荡 5-10 s;10,000-15,000 r/min 离心 2-3 min;取上清液用于扩增反应,2-8℃保存或冻存
剩余 DNA。
4.2.4 从精液中提取 DNA:
a) 取精液(不少于 3 µL)放入 1.5 mL 离心管内,加入 200 µL 5% Chelex 100(100-200 目);
b) 加入 2 µL 10 mg/mL 蛋白酶 K 和 7 µL 1 mol/L DTT,轻轻混匀;
c) 56℃保温 30-60 min,高速振荡 5-10 s;
d) 10,000-15,000 r/min 离心 10-20 s;
e) 沸水煮 8 min;
f) 高速振荡 5-10 s;
g) 10,000-15,000 r/min 离心 3 min;
h) 取上清液用于扩增反应;
i) 2-8℃保存或冻存剩余 DNA, 再次使用时重复步骤 f)-h)。
4.2.5 从精斑样品中提取 DNA:
a) 适量精斑检材,剪碎后放到 1.5 mL 离心管中;
b) 加入 1 mL 纯水,室温保温 30 min;
c) 高速振荡 1 min,用牙签去除载体;
d) 10,000-15,000 r/min 离心 2 min;
e) 去上清仅留 50 µL,用无菌吸头吹打沉淀;
f) 加入 5% Chelex 100(100-200 目)至 200 µL,加入 2 µL 10mg/mL 蛋白酶 K 和 7 µL 1 mol/L DTT,
轻轻混匀;
g) 56℃保温 60 min;
h) 高速振荡 5-10 s,10,000-15,000 r/min 离心 10-20 s;
i) 沸水煮 8 min;
j) 高速振荡 5-10 s,10,000-15,000 r/min 离心 3 min;
k) 取上清液用于扩增反应;
l) 2-8℃保存或冻存剩余 DNA,再次使用时重复步骤 i)-k)。 SF/Z JD0105001-2010
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4.2.6 从人体组织块中提取 DNA:
a) 取适量组织块,用纯水冲洗;
b) 剪碎(或研磨成碎块),加入 1 mL STE 提取液(100 mmol/L NaCl,10 mmol/L Tris-HCI,1 mmol/L
EDTA,pH8.0),混匀后加入 20% SDS 75 µL,10 mg/mL 蛋白酶 K 40 µL,于 56℃酶解至清;
c) 于 1.5 mL 离心管中加入 200 µL 10% Chelex 100(100-200 目),加入上述酶解后溶液 20 µL,
混匀;
d) 56℃保温 30 min;
e) 剧烈振荡 5-10 s;
f) 沸水煮 8 min;
g) 剧烈振荡 5-10 s;10,000-15,000 r/min 离心 3 min;取上清液用于扩增反应;
h) 2-8℃保存或冻存剩余 DNA,再次使用时重复步骤 g)。
4.2.7 从羊水中提取 DNA:
a) 取羊水约 1.5 mL,10,000~15,000 r/min 离心 5 min,弃上清;
b) 在沉淀中加入 200 µL 5% Chelex(100-200 目)溶液和 20 µL 10 mg/mL PK,56℃保温 3 hr;
c) 高速振荡 5-10 s,沸水浴 8 min;
d) 高速振荡 5-10 s,10,000~15,000 r/min 离心 5 min,取上清液用于扩增反应;
e) 2-8℃保存剩余 DNA,再次使用时重复步骤 d)。
4.3 DNA 定量分析
按照中华人民共和国公共安全行业标准 GA/T382-2002 和 GA/T383-2002 的要求进行。
4.4 PCR 扩增与分型
4.4.1 基因座
选用多态性基因座(如 STR、SNP 等类型)进行 PCR 扩增,其中,常染色体 STR 基因座宜符合如
下要求:(1)经过群体遗传学调查,多态性高,非父排除率在 0.7 以上。(2)经过 500 次以上减数分裂
的家系调查,基因座的突变率在 0.002 以下。目前,建议采用商品化试剂盒进行检验,检测系统的累计
非父排除率应达到 99.99%以上。除常染色体基因座外,建议在需要时增加 Y-STR、X-STR 的检验。其
中,Y-STR 系统可选择 DYS456、DYS389I、DYS390、DYS389II、DYS458、DYS19、DYS385 a/b、DYS393、
DYS391、DYS439、DYS635、DYS392、Y GATA H4、DYS437、DYS438、DYS448 等基因座进行单倍
型检验;X-STR 系统可选用 GATA172D05、HPRTB、DXS6789、DXS6795、DXS6803、DXS6809、DXS7132、
DXS7133、DXS7423、DXS8377、DXS8378、DXS9895、DXS9898、DXS10101、DXS10134、DXS10135、
DXS10074 等。
4.4.2 扩增试剂
建议选用商品化试剂盒(带荧光标记的 PCR 体系)。若选用其它来源的扩增体系,须经验证、认可
后方可用于日常检案。每批检验均应用标准样品(已知浓度和基因型的 Control DNA)和(或)以前检
验过的、已知基因型的样本作为阳性对照,以不含 DNA 的样本作为阴性对照。SF/Z JD0105001-2010
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4.4.3 PCR 体系与温度循环参数
按试剂盒的操作说明书进行。
4.4.4 扩增产物的检测与结果的判读
使用荧光分析仪,对 PCR 产物进行毛细管电泳分析,使用等位基因阶梯(Ladder)作为参照品来
判别样本的基因型,步骤方法按照仪器操作手册。
4.5 鉴定意见
鉴定意见是依据 DNA 分型结果对是否存在亲权关系作出的判断。鉴定意见一般分“排除存在亲权
关系”和“支持存在亲权关系”两种情形。
4.5.1 排除存在亲权关系
经过累计非父排除率大于 99.99%的多个基因座的检测,发现有 3 个以上的基因座不符合遗传规律,
可以排除亲权关系的存在。
4.5.2 支持存在亲权关系
经过累计非父排除率大于 99.99%的多个基因座的检测,发现基因座均符合遗传规律,此时必须计
算亲权指数 PI(即似然率 LR),若 CPI≥10000,则支持亲权关系的存在。
4.5.2.1 累积亲权指数计算:
CPI=PI1×PI2×PI3×…×PIn (1、2、3、n 代表第 1、2、3、n 个基因座的 PI 值)
4.5.2.2 常染色体 STR 体系各种遗传组合 PI 值计算方法:
见表 1~3,表中 p、q、r 分别表示等位基因 P、Q、R 的分布频率。
表 1 三联体常染色体 STR 基因座亲权指数计算公式
生 母
基因型
孩 子
基因型
生父基因
(推断)
被 检 父
基因型
PI 值计算
公式
PP PP P PP 1/p
PP PQ Q QQ 1/q
PP PP P PQ 1/(2p)
PP PQ Q QR 1/(2q)
PP PQ Q PQ 1/(2q)
PQ QQ Q QQ 1/q
PQ QR R RR 1/r
PQ QR R RS 1/(2r)
PQ PR R PR 1/(2r)
PQ QQ Q QR 1/(2q)
PQ PQ P 或 Q PP 1/(p+q)
PQ PQ P 或 Q QQ 1/(p+q)
PQ PQ P 或 Q PQ 1/(p+q)
PQ PQ P 或 Q PR 1/[2(p+q)] SF/Z JD0105001-2010
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表 2 二联体常染色体 STR 基因座亲权指数计算公式
孩 子
基因型
被 检 父
基因型
PI 值计算
公式
PP PP 1/p
PP PQ 1/(2p)
PQ PP 1/(2p)
PQ PQ (p+q)/(4pq)
PQ PR 1/(4p)
表 3 祖孙常染色体 STR 基因座亲权指数计算公式
祖父母 孩子 孩子生母 孩子生父基因
亲权指数
计算公式
PR × QS PQ PQ P 或 Q 1/[2(p+q)]
PQ × PR PQ PQ P 或 Q 3/[4(p+q)]
PQ × PQ PQ PQ P 或 Q 1/(p+q)
PP × PQ PQ PQ P 或 Q 1/(p+q)
PP × PQ PQ QS P 3/(4p)
PR × RS PP PQ P 1/(4p)
PR × QS PP PQ P 1/(4p)
PQ × PR PP PQ P 1/(2p)
PQ × PQ PP PQ P 1/(2p)
PR × RS PP PP P 1/(4p)
PR × QS PP PP P 1/(4p)
PQ × PR PP PP P 1/(2p)
PQ × PQ PP PP P 1/(2p)
4.5.2.3 Y-STR 检测系统的 PI 值计算
PI=1/f (f 指单倍型在群体中的频率)
4.5.2.4 X-STR 检测系统的 PI 值计算(见表 4、表 5)
表 4 三联体 X 染色体 STR 基因座亲权指数计算公式
孩子生母基
因分型结果
女孩基因
分型结果
被检父基因
分型结果
PI 值计算
公式
PP PP P 1/p
PQ PP P 1/p
PP PQ Q 1/q
PQ PQ P 1/(p+q)
PQ PR R 1/r SF/Z JD0105001-2010
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表 5 二联体 X 染色体 STR 基因座亲权指数计算公式
女孩样本
分型结果
被检父样本
分型结果
PI 值计算
公式
PP P 1/p
PQ P 1/(2p)
4.6 检验过程中特殊情况的处理
a) 经 DNA 检测(系统的累计非父排除率在 99.99%以上),发现各基因座符合相应的遗传定律,
2000
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